Абсолютное большинство научных исследований в молекулярной биологии так или иначе требуют такой процесс, как выделение нуклеиновых кислот. Они применяются для ПЦР, секвенировании, а также для многих других задач. Однако, в самом процессе есть множество разных технологий, которые действуют по-разному и требуют различный биоматериал. Вообще, развитие технологий идет аж с середины 19 века, но тогда это все было “пальцем в небо”. Но как только наука начала развиваться в этом направлении, то и технологии начали за ними поспевать. Конечно, сейчас технологий много, например, можно использовать станцию для выделения нуклеиновых кислот. В рамках данной статьи будут рассмотрены некоторые варианты, нужные для выделения нуклеиновых кислот.
Первый способ — выделение с помощью фенол-хлороформа. Его развитие начинается с 1967 года и по сей день держит планку популярности. За основу придется клеточный литаз, который смешивается с фенолом, изоамиловым спиртом и хлороформом. Для сложных образцов также добавляется перхлорат натрия, чтобы можно было полностью отделить белки от кислот. Свое применение они нашли почти везде, так как особо много сложного оборудования не требуется, так как и вложений. Но вот из-за участвующих веществ процесс нельзя автоматизировать. Для анализа может понадобиться купить биохимический анализатор крови для лаборатории.
Есть также сорбционная экстракция на колонках Silica. Тут в основе лежит уже избирательная сорбция, в присутствии хаотропной соли. Ингибиторы и прочие компоненты, при этом, остаются в растворе. С помощью процесса центрифугирования силика с НК осаждается, а супернатант удаляется вместе с ингибиторами ПЦР. Такая методика позволяет получить очень чистые и качественные нуклеиновые кислоты. Они еще будут отличаться высокой воспроизводимостью и простой, по сравнению с предыдущим методом. Но важно понимать, что столько манипуляций могут приводить к контаминации, а также затрудняется выделение коротких фрагментов ДНК на спин-колонках. Занимает сам процесс около 20 минут, в зависимости от биоматериала. Но ценник уже будет повыше. Из альтернативных вариантов есть также анализатор bactec.
